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          幫助中心-北京博奧森生物技術有限公司
          Western Blotting 問題解答
          1、膠片上存在反轉印象(如:亮的條帶、黑的背景)?

          原因:HRP的濃度過高;

          解決:稀釋HRP至少10倍。

          2、膜上有黃色或棕色的沉積?

          原因:HRP的濃度過高;

          解決:稀釋HRP至少10倍。

          3、在暗室中條帶過于明亮?

          原因:HRP的濃度過高;

          解決:稀釋HRP至少10倍。

          4、條帶的發光時間持續了至少8小時?

          原因:HRP的濃度過高;

          解決:稀釋HRP至少10倍。

          5、信號太弱或沒有?

          原因:

          1.太多的HRP積聚導致信號快速的消退;

          2.抗原或抗體的濃度不夠;

          3.轉印不成功;

          4.HRP或其他底物的效價降低。

          解決:

          1.稀釋HRP至少10倍;

          2.增加其濃度;

          3.尋找合適的轉移方法和條件;

          4.選擇其他的合適底物。

          6、背景高?

          原因:

          1.HRP濃度過高;

          2.封閉無效;

          3.不適合的封閉試劑;

          4.洗滌不充分和洗滌液的量;

          5.膠片曝光過度;

          6.抗原或抗體的濃度太高。

          解決:

          1.稀釋HRP至少10倍;

          2.尋找合適的封閉方法;

          3.選用其他的封閉試劑;

          4.增加洗滌的時間,次數;

          5.減少曝光時間;

          6.稀釋抗原或抗體。

          7、蛋白質條帶上有空泡影像?

          原因:

          1.蛋白質沒有被充分轉??;

          2.膜沒有預先浸濕;

          3.在膠片和膜之間有氣泡。

          解決:

          1.尋找合適的轉移方法和條件;

          2.在轉印前充分浸濕;

          3.在暴光之前趕走氣泡。

          8、膠片上背景彌散?

          原因:HRP標記的抗體出現了積聚;

          解決:稀釋HRP至少10倍。

          9、無特異性條帶?

          原因:

          1.HRP濃度過高;

          2.SDS促使非特異蛋白質條帶黏附在目的蛋白質條帶上。

          解決:

          1.稀釋HRP至少10倍;

          2.在操作過程中不要加SDS。

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