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          流式細胞檢測-北京博奧森生物技術有限公司
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          流式細胞檢測
          發表者:北京博奧森生物      發表時間:2020-5-28

          流式檢測平臺介紹
          Bioss在原有的流式細胞儀BD FACSCalibur基礎上引進新一代智能化個性化-ACEA NovoCyte系列流式細胞儀。此流式細胞儀已獲得醫療器械注冊證,可廣泛應用于科研及臨床領域。配有三激光器(405nm,488nm,640nm), 13個熒光檢測通道,可同時完成13個指標檢測的多色分析。分析軟件可提供客戶30天分析試用權,具有高效的數據采集、分析和報告功能、靈活的在線離線補償功能,可以滿足研究人員針對各種類型的細胞或生物顆粒的多色分析等實驗需求。


          一、檢測服務內容

          本服務項目主要是使用流式細胞儀對客戶提供的細胞樣品或全血樣品進行檢測分析。主要檢測內容有:細胞抗原鑒定、細胞分型及鑒定、細胞凋亡檢測、細胞周期分析、JC-1等。


          二、服務流程 

          1

          客戶提交流式細胞檢測請求與實驗要求,與公司商定具體的實驗項目、數量和費用,雙方簽訂《委托流式細胞檢測服務合同書》;

          2

          客戶提供檢測樣品,我公司按照協定要求安排檢測項目預實驗,雙方根據預實驗結果商定實驗技術參數細節;

          3

          公司實驗室正式開展檢測實驗,在規定時間內向客戶提交實驗數據和檢測報告。


          三、樣品要求

           客戶提供信息:1.提供抗體貨號及廠家  2.細胞信息  3.實驗方案及具體要求

           樣品寄送須知:細胞常溫, 生長良好,無污染,細胞數量>106個;組織離體后制成單細胞懸液,加入PBS/培養基內4℃運輸;血液采集在EDTA/肝素鈉的采血管內混勻,4℃運輸。

          四、交付標準

           上機原始數據,高清散點圖直方圖密度圖等數據分析圖片,詳細檢測報告。

               

                更多詳情請見官網:www.fhsyjt.com



          實驗數據分享

          細胞抗原鑒定

          實驗原理:根據抗原-抗體反應原理,檢測細胞表面或者胞內抗原,對于同一樣品檢測不同種抗原,可以分為單標、雙標以及多標。實驗流程:離心去上清-調整細胞密度-固定穿膜-加入標記抗體-孵育-離心去上清-重懸細胞-上機檢測。

          實驗結果展示:


          單染直方圖

          單染散點圖

          雙染散點圖


          細胞凋亡檢測

          實驗原理:Annexin V選擇性結合磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine,簡稱PS),是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS高親和力特異性結合。在正常細胞中, PS只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的PS由脂膜內側翻向外側。使用帶有綠色熒光FITC標記的Annexin V,即Annexin V-FITC,則可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡直接檢測到PS外翻這一細胞凋亡的重要特征。此方法被公認為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。實驗流程:細胞培養-轉染或藥物處理-細胞收集- Annexin V-FITC/PI標記-上機檢測。實驗結果展示:

          左下象限LL為活細胞;右下象限LR為早期凋亡細胞;右上象限UR為晚期凋亡細胞;左上象限UL為碎片及壞死細胞。


          Annexin V-FITC(綠色)染色細胞為早期凋亡細胞;PI(紅色)染色細胞為壞死細胞;Annexin V-FITC/PI雙染細胞為晚凋或壞死細胞


          細胞周期檢測

          實驗原理:碘化丙啶(Propidium,簡稱PI)是一種雙鏈DNA 的熒光染料,PI和雙鏈DNA 結合后可以產生熒光,并且熒光強度和雙鏈DNA 的含量成正比。細胞內的DNA 被PI染色后,可使用流式細胞儀對細胞進行DNA 含量測定,然后根據DNA 含量的分布情況進行細胞周期分析。實驗流程:細胞培養-轉染或藥物處理-細胞收集-細胞周期試劑盒-上機檢測。實驗結果展示:


          細胞周期擬合圖


          線粒體膜電位檢測-JC-1

          實驗原理:線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。JC-1是一種理想的用于檢測線粒體膜電位的熒光探針,可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。其原理是,當線粒體膜電位較高時,JC-1聚集在線粒體基質中,形成聚合物,488nm激發時的最大發射波長為590nm,可以產生紅色熒光,在流式上表現為FL1和FL2雙陽性;當線粒體膜電位較低時,JC-1不能聚集在線粒體基質中,此時JC-1為單體,488nm激發時最大發射波長為527nm,可以產生綠色熒光,形成流式圖匯總所有細胞FL1為陽性。凋亡細胞則大多為FL1單陽性。不同熒光顏色的轉變反應線粒體膜電位的變化,常用紅綠熒光的相對比例衡量線粒體去極化的比例。實驗流程:細胞離心去上清-調整細胞密度-裝載探針-孵育探針-上機檢測。
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